Radioimmunoprecipitatsiya tamponi - Radioimmunoprecipitation assay buffer

Radioimmunoprecipitatsiya tamponi (RIPA buferi) - bu lizis buferi odatlangan liza uchun hujayralar va to'qima radio immunoprecipitatsiya tahlil qilish (RIPA).^[1][2] Bu bufer ko'proq denatura qiladi NP-40 yoki Triton X-100 chunki u tarkibida ionli yuvish vositalari SDS va natriy deoksixolat faol moddalar sifatida mavjud va yadro ekstraktlarini tayyorlashda yadro membranalarini buzish uchun ayniqsa foydalidir. RIPA buferi past fonni beradi, lekin denaturatsiya qilishi mumkin kinazlar.

Retsept

RIPA bufer retseptlari mualliflar orasida bir oz farq qiladi va quyidagilarni o'z ichiga olishi mumkin:

• 10-50 mm Tris -HCl (10 mm) natriy fosfat o'rniga ishlatilishi mumkin), pH 7-8
• Osmotik bosimni fiziologik darajasida ushlab turish uchun 150 mM NaCl
• nonionik yuvish vositalari (1% Triton X-100 yoki NP-40 ) oqsillar orasidagi yoki naycha bilan o'ziga xos bo'lmagan o'zaro ta'sirini oldini olish uchun
• anyonik yuvish vositalari (0,1-0,5%) deoksixolat, 0.1-0.5% SDS ). Buni har bir tahlil uchun optimallashtirish kerak, konsentratsiya qancha yuqori bo'lsa, natija shunchalik toza bo'ladi, lekin signal pastroq bo'ladi.

Quyidagi ingredientlar ixtiyoriy va kerak bo'lganda qo'shiladi:

• Proteaz inhibitörler (1 mm) PMSF (i-propanoldagi 1 M zaxiradan yangi), har biri 1 µg / ml leupeptin, aprotinin, pepstatin, 1-5 mm EDTA, 0,5-1 mm EGTA, 5 mm aminokaproik kislota ) yoki savdo proteaz inhibitori kokteyli (ishlab chiqaruvchining ko'rsatmasiga binoan foydalanish)
• Har birida 1 mM Na₃VO₄ va Na₄P₂O₇ fosfataza inhibitori sifatida (agar fosforillanish holati muhim bo'lsa)
• Konservant sifatida 1 mM NaF (juda zaharli!)
• 5-10 mm dithiotreytol (DTT) yoki b-merkaptoetanol antioksidant sifatida. DTT βME dan qimmatroq, ammo uning oksidlanish-qaytarilish potentsiali Cys-Cys bog'lanishiga mos keladi.

Adabiyotlar

Bu biologiya maqola a naycha. Siz Vikipediyaga yordam berishingiz mumkin uni kengaytirish.